ABSTRACT
La vitrificación de ovocitos de mamíferos es considerada una técnica en experimentación. La supervivencia de los ovocitos es extremadamente variable, según las técnicas utilizadas e influida por una serie de condiciones. El objetivo de éste trabajo fue determinar los efectos de la vitrificación en ovocitos de gata domestica adulta en estación reproductiva y madurados in vitro. Se obtuvieron 33 ovarios correspondientes a hembras de más de un año en buen estado nutricional y sin tratamiento hormonal, ovariectomizadas en domicilio del propietario por profesional veterinario. Los ovarios fueron trasladados al laboratorio y se fragmentaron por microdisección bajo microscopio estereoscópico en caja de Petri con solución de buffer fosfato salino modificado con suero de ternero inactivado y antibióticos para la obtención, evaluación y selección de los complejos cúmulo-ovocitos (CCOs) de buena calidad. Se vitrificaron 506 CCOs en pajuelas de 0.25 ml con 10-12 ovocitos cada una y almacenados por 30 días en nitrógeno líquido (N2) a -196 C. Posteriormente se desvitrificaron las pajuelas, recuperándose 320 CCOs, los que fueron madurados in vitro. Transcurrido ese tiempo se evaluaron los CCOs, descartándose 50 por presentar signos de degeneración. En los 270 restantes se observó buena expansión del cúmulo, citoplasma uniforme y oscuro e integridad de la zona pelúcida. A estos últimos se los dividió en dos grupos similares para evaluar la viabilidad, a uno se lo coloreó con metil tiazol tetrazolio y al otro con Azul Tripán. En ambos se constató un resultado positivo para la viabilidad de los CCOs. El análisis de los resultados nos permite concluir que la vitrificación comprometió la integridad de un importante número de CCOs aunque más del 50% respondió en cultivo favorablemente, mostrando signos de viabilidad esperados. Estos resultados hacen necesarios la profundización en el mejoramiento del protocolo para incrementar el porcentaje de viabilidad.
Vitrification of mammalian oocytes is a technique considered in experimentation. Oocyte survival is extremely variable, according to the techniques used and influenced by a number of conditions. The objective of this study was to determine the effects of adult domestic cat oocyte matured in vitro and vitrified in breeding season. We obtained 33 ovaries from housecats in good nutritional status without hormonal treatment, ovariectomized by a veterinary professional at home. The ovaries were transported to the laboratory and fragmented by microdissection under a stereoscopic microscope in a petri dish with modified buffer saline phosphate solution, inactivated calf serum and antibiotics to the collection, evaluation and selection of good quality cumulus-oocyte complexes (COCs). 506 COCs were vitrified in 0.25 ml straws each with 1012 oocytes and stored for 30 days in liquid nitrogen (N2) at -196 °C. Then the straws were thawed, recovering 320 CCOs, which were matured in vitro. After this time the COCs were evaluated, discarding 50 which showed signs of degeneration. In the remaining 270 COCs good cumulus expansion was observed and also uniformly dark cytoplasm and integrity of the zona pellucida. The latter were divided into two similar groups to assess the feasibility; one was stained with Methylthiazblyl tetrazolium and the other with Trypan Blue. Both tested positive for the viability of the CCOs was found. The analysis of the results allow us to conclude that vitrification compromised the integrity of a large number of CCOs although more than 50% responded favorably in culture, showing signs of expected viability. According to these results it is necessary to further improve the protocol to increase the percentage of viability.